尊龙凯时提供的细胞培养条件如下：

培养条件

使用1640培养基，添加10% FBS和1% PS，适用于贴壁和悬浮细胞。培养温度设置为37℃。

传代方法

• 首次传代推荐比例为1:2。
• 如果细胞未超过80%的汇合度，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱中培养。
• 当细胞密度超过80%时，可以进行传代。

换液情况

每两天更换一次培养液，以确保细胞的健康生长。

细胞处理及观察

收到细胞后，用75%的酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。观察细胞生长情况，并拍照留存（推荐倍数为40x、100x和200x）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其取出，添加5ml以上的完全培养基础以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法，竖直放置培养瓶，在培养箱静置约1小时，轻轻吸掉3ml左右的培养基，随后补充3ml的完全培养基。如果培养基颜色变化明显，可以直接添加500ul左右的FBS。在传代时，可以直接补充5ml培养基，分为两个培养瓶培养。
2. 如需分瓶，将细胞悬液收集到离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬，按1:2的比例分到新T25瓶中，同时加入6-8ml新配置的完全培养基，以确保细胞的生长活力。

细胞冻存步骤

1. 当细胞生长至培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 沉淀细胞后，加入1ml无血清冻存液（如尊龙凯时提供的）混匀，再加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如果需要转入液氮罐，须在-80℃中存放24小时后再进行转移。

细胞复苏注意事项

从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶。然后用75%的酒精擦拭外壁，将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养，第二天更换为新鲜完全培养基。

请注意，某些细胞可能在运输过程中容易脱落，这是正常现象。如脱落细胞过多，可将培养液收集至离心管并根据上述步骤处理，以确保细胞健康生长并逐步适应培养环境。选择尊龙凯时的培养基将有助于优化细胞生长和传代效果，维护细胞的活性。